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細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
更新時(shí)間:2024-03-22
訪(fǎng)問(wèn)量:1529
廠(chǎng)商性質(zhì):其他
實(shí)驗(yàn)步驟
標(biāo)記六孔板
用marker筆在六孔板底部畫(huà)平行線(xiàn),平行線(xiàn)之間的距離0.5cm,為了保證后續(xù)拍照位置是相同的;
鋪板
細(xì)胞重懸鋪板,密度控制在第二天長(zhǎng)滿(mǎn),若過(guò)夜后細(xì)胞wq長(zhǎng)滿(mǎn),也可以適當(dāng)延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間,但如果細(xì)胞密度已經(jīng)很大,盡量重新鋪板,因?yàn)榭赡苓^(guò)一天后細(xì)胞太滿(mǎn),會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)逐漸變差,后續(xù)細(xì)胞可能不遷移而是凋亡;
制造劃痕
第二天用直尺比著使用10ul槍頭制造劃痕,劃痕方向與標(biāo)志線(xiàn)垂直,保持力度一致,盡量一次性劃完,然后PBS沖洗3次,洗去漂浮的細(xì)胞
為了減少細(xì)胞增殖所引起的假陽(yáng)性結(jié)果,降低細(xì)胞增殖對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響,將wq培養(yǎng)基換成無(wú)血清培養(yǎng)基和低血清培養(yǎng)基(FBS<2%繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞);
拍照
拍照前用PBS沖洗3次,一般認(rèn)為24h為細(xì)胞的一個(gè)周期,所以檢測(cè)時(shí)間不要超過(guò)一個(gè)周期的時(shí)間,按照6孔板背后畫(huà)線(xiàn)的垂直方向劃痕





